DWD-1 UV detektor (vysoce výkonný dvojitý paprsek s dvojitou vlnovou délkou) zabudované zpracování dat

Rozsah vlnových délek: 254nm, 280nm (současná detekce), další volba dvou vlnových délek současně detekovat mezi 254nm, 280nm-400nm spektrální linie.

Charakteristiky přístroje DWD-1

Měření dvojité vlnové délky proteinu 280nm/254nm:

Proteinové molekuly obsahují aromatické aminokyseliny jako tyrosin a trysin s konjugovanými dvojitými vazbami. Mají vlastnost absorbovat ultrafialové světlo, jejich absorpční vrchol je ve vlnové délce 280 nm a hodnota hustoty optické absorpce vrcholu v této vlnové délce je přímo úměrná jejich koncentraci, takže může být použita jako základ pro kvalitativní a kvantitativní stanovení bílkovin, a proto se ultrafialová absorpce ve vlnové délce 280 nm obvykle používá pro nepřetržité sledování koncentrace bílkovin v systémech analýzy. Avšak vzhledem k tomu, že různé bílkoviny obsahují různé množství tyrosinu a tryzinu, je nutné přesně stanovit množství, aby byly čisté bílkoviny, které mají být testovány, srovnány jako kritérium, nebo byly známy jako referenční koeficienty. Navíc mnoho nebílkovinových látek má také určitou absorpční schopnost při vlnové délce 280 nm, což může způsobit rušení. Jejich účinky jsou větší zejména nukleové kyseliny (puriny a pyrimidiny). Absorpce je 10x silnější (na gram) než bílkoviny při 280 nm, ale nukleová kyselina je silnější při 254 nm, jejíž absorpční vrchol je blízko 254 nm. Nukleární kyselina při 254 nm má dvojnásobný koeficient záření než při 280 nm.

Proteiny naopak absorbují více než 280 nm UV než 254 nm.

Obvykle：

Poměr absorpce světla pro čisté bílkoviny: A280/A254" 1,8

Poměr absorpce světla čisté nukleární kyseliny: A280/A254

Proto při současné přítomnosti nukleární kyseliny v proteinovém roztoku (většina biologických systémů) musí být stanovena současně OD254nm a OD280nm. Na základě poměru absorpce dvou vlnových délek se pak opraví skutečný obsah bílkovin pomocí empirického vzorce, aby se odstranil vliv nukleové kyseliny.

Proteinová koncentrace: 1,45 x A280 – 0,74 x A254 (mg/ml)

Tento empirický vzorec byl vytvořen pomocí údajů stanovených řadou směsí bílkovin (kvasinkové enolyázy) a nukleárních kyselin (kvasinkové nukleární kyseliny) v známých poměrech různých koncentrací.